HPLC法测定泻痢消胶囊中芍药苷的含量

HPLC法测定泻痢消胶囊中芍药苷的含量

摘　要：目的 建立泻痢消胶囊中芍药苷的含量测定方法。方法 色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（25:75）；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL·min-1。结果 芍药苷在0.484 4～2.422 0 μg（r=0.999 9）范围内线性关系良好，回归方程分别为Y = 190 9276.923 1X – 4 265.72(r = 0.999 9)，平均加样回收率分别为99.67%（RSD=2.13%）。结论 所建立的方法准确可靠，重复性好，可用于泻痢消胶囊中芍药苷的质量控制。

关键词：泻痢消胶囊；芍药苷；HPLC 

　　泻痢消胶囊是由酒黄连、酒白芍、槟榔、泽泻、甘草等十二味中药加工制备而成，具有清热燥湿，行气止痛之功效[1]，在临床上常用于大肠湿热所致的腹痛泄泻，大便不畅，下痢脓血等症，效果显著。原标准中只对制剂中的黄连小檗碱成分进行了含量测定，而白芍养血敛阴，缓急和里，为方中要药，目前认为芍药苷为白芍的有效成分，因此，本研究对制剂中的芍药苷进行了含量测定，为完善泻痢消胶囊质量控制提供一定参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器  Agilent1100高效液相色谱仪；UV1100型紫外分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；KQ-250型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AB135-S电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；
1.2 试药  芍药苷对照品（110736-200424）均购自中国药品生物制品检定所；泻痢消胶囊（云南白药集团股份有限公司）购自青岛国风药店；甲醇、磷酸为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件  色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸（25︰75）；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL·min-1。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。
2.2 溶液的配制
2.2.1对照品溶液  取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并制成每1 mL含120μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液  取本品内容物，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率300 W，频率50 kHz）30 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过、即得。
2.2.3 阴性对照溶液  取白芍以外的其余药味，制得不含白芍的空白制剂，照供试品溶液的制备方法制备，即得。
2.3 方法学考察
2.3.1 专属性试验  精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，按2.1项下色谱条件进行测定。结果供试品中芍药苷色谱峰能达到基线分离，且保留时间与相应对照品一致；阴性对照溶液在相同保留时间处无吸收峰，表明其余药味对芍药苷的测定无干扰，结果见图1。
         
           图1 芍药苷对照品（A）、供试品（B）、阴性对照（C）HPLC图
2.3.2 线性关系考察  取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含242.2μg的溶液，精密量取2、4、6、8、10ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，按照2.1项下色谱条件进行测定。以芍药苷进样量为横坐标（X），对应峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程为：Y = 190 9276.923 1X – 4 265.72，r = 0.999 9。结果表明，芍药苷进样量分别在0.484 4～2.422 0μg范围内线性关系良好。
2.3.3 精密度试验  精密吸取2.2.1项下对照品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，重复测定6次，进样量10 μL。结果芍药苷面积的RSD分别为1.41%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.3.4 稳定性试验  取上述供试品溶液分别于配制后的1、3、5、7、9、12 h测定芍药苷峰面积，进样量10 μL。结果芍药苷峰面积的RSD分别为0.96%（n=6）、，表明供试品溶液在12h内具有良好的稳定性。
2.3.5 重复性试验  取同一批次泻痢消胶囊（批号20101004）内容物，共6份，分别按2.2.2项下方法制得供试品溶液，照2.1项下色谱条件进行测定，进样量10 μL。结果制剂中芍药苷平均含量分别为12.358 3 mg/g，RSD为1.69%（n=6），表明本含量测定方法重现性较理想。

2.3.6 加样回收试验  取已知含量的泻痢消胶囊（批号20100401，芍药苷含量12.358 3 mg/g）内容物，共6份，各约0.25g，精密称定，分别精密加入芍药苷对照品溶液（0.1205 mg/mL）和甲醇各25 mL，称定重量，其余按2.2.2项下方法操作，制得供试品溶液，照2.1项下色谱条件进行测定，进样量10 μL，计算加样回收率，结果见表1。
表1                          加样回收试验结果（n=6）
2.4 样品含量测定  取3批样品按供试品溶液制备法制得供试品溶液，并按2.1项下色谱条件进行测定，每批样品测定3份，结果见表2。
表2                         样品含量测定结果（n=3）
3 讨论
3.1供试品制备方法选择  本研究对供试品制备方法进行了筛选，甲醇液直接超声处理，进样测定，杂质干扰严重，芍药苷色谱峰分离不理想，进而采用正丁醇萃取法进行除杂处理[2]，结果供试品溶液中中芍药苷色谱峰分离良好。
3.2 流动相的优选  本研究参考药典及相关文献[3,4]中关于芍药苷的含量测定方法，对流动相进行了筛选，最终选用甲醇-磷酸（25:75）系统，此系统能有效减小芍药苷拖尾，使色谱峰峰型良好，保留时间适中。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京,化学工业出版社,2010:851.
[2] 王晓燕,朱宝珠,李顺吉,等.RP-HPLC法测定逍遥丸中芍药苷的含量[J].中医研究,2008,21(5): 14-16.
[3] 唐富丽，秦郁文.HPLC测定逍遥合剂中芍药苷的含量[J].齐鲁药事,2011,4:633-635.
[4] 祝明,胡梅素,薛冬,等.高效液相色谱法测定妇宝颗粒中芍药甙的含量[J].中国药品标准;2001,2：112-114.